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上海信帆告訴大家:做明膠酶譜法實(shí)驗(yàn)的幾個(gè)小貼士

更新時(shí)間:2015-06-23      瀏覽次數(shù):1625

大家在用明膠酶譜法測(cè)定MMP2/9活性的時(shí)候,總是會(huì)遇到一些不同的問(wèn)題,現(xiàn)在我們就把實(shí)驗(yàn)中的一下小貼士告訴大家,供大家參考。

1.做酶譜要測(cè)定樣品蛋白的濃度(同Western blot,建議用BCA法);
2.酶譜法是測(cè)定樣品中MMP-2、9活性的,如果煮沸使蛋白變性就沒(méi)有用了,故禁忌煮沸;
3.上樣緩沖液中也不能加β-巰基乙醇,這點(diǎn)由western blot轉(zhuǎn)作明膠酶譜的朋友切記、切記;
4.蛋白上樣量必須保證一樣,不會(huì)出現(xiàn)一致的透明條帶,如果不能保證上樣量一致,測(cè)出的相對(duì)活性也沒(méi)有統(tǒng)計(jì)分析的意義;
5.上樣時(shí)zui重要的一點(diǎn),必須在4℃環(huán)境中操作,我用的是冰臺(tái),同時(shí)所用的蛋白樣品(-80℃冰箱)不能是以前曾解凍使用過(guò)的,必須是新取出的,因?yàn)橹灰鈨鼍蜁?huì)有部分酶降解,影響你的結(jié)果。此外做過(guò)一次酶譜的蛋白樣品也不要反復(fù)使用,下次應(yīng)使用其它已分裝、未解凍過(guò)的樣品;
6.電泳后的步驟很簡(jiǎn)單,液體別配錯(cuò),照著方法做就可以了。

如果你曾做過(guò)Western blot,在這里恭喜你了,只要注意幾個(gè)小細(xì)節(jié),明膠酶譜對(duì)你非常簡(jiǎn)單。

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