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信帆生物為您提供:一氧化氮試劑盒說明書,NO檢測試劑盒

更新時間:2018-04-13      瀏覽次數:1356

 信帆生物為您提供:一氧化氮試劑盒說明書,NO檢測試劑盒。南京信帆生物供應一氧化氮檢測試劑盒,咨詢!

一氧化氮(NO)檢測試劑盒說明書

                                                              

1. 測定意義和原理

一氧化氮NO(即血管內皮舒張因子),在生物體內作為一種反應性*的自由基,兼有信使和神經遞質作用,同時又是一種效應分子,在體內具有廣泛的生理作用,如松弛血管平滑肌,抑制血小板聚集,調節腦血流,介導細胞毒效應和免疫調節,參與學習和記憶、動脈粥樣硬化等作用。NO產生異常于某些疾病的發生有著密切關系。

 

NO本身半衰期極短,血液中的NO主要由血管內皮細胞、血管平滑肌細胞、血小板、巨噬細胞等產生以硝酸鹽及亞硝酸鹽的形式存在,通過其濃度可以間接測得NO的濃度。

NO遇氧及水生成硝酸鹽及亞硝酸鹽,后二者遇硝酸鹽顯色劑可生成淡紅色偶氮化合物,通過檢測可得知NO 濃度。

 

2. 試劑組成及配置(96T)

 

試劑組成

保存及有效期

備注

試劑一,20mlx1瓶

4°C保存一年

 

試劑二,10mlx1瓶

4°C保存一年

 

試劑三,10mlx1瓶

4°C避光保存

過飽和溶液,如果結晶析出,60°C以上加熱溶解*以后使用

試劑四,3mlx1瓶

4°C避光保存

 

試劑五,3mlx1瓶

4°C保存

 

2mmol/L亞硝酸鈉標準液,1mlx1支

4°C保存

 

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顯色劑的配置: 試劑三:試劑四:試劑五=2.5:1:1,現用現配,配好的顯色劑放冰箱保存,顏色變得很深后不可使用

 

20umol/L亞硝酸鈉標準液配置:取2mmol/L亞硝酸鈉標準液0.1ml加雙蒸水定容到10ml即為20umol/L 亞硝酸鈉標準液,現用現配。

 

3. 操作過程

 

A. 前處理

血清(血漿):取血清(血漿)原液100ul加試劑一200ul,混勻,加試劑二100ul,漩渦充分混勻后靜置10分鐘,3500-4000轉/分鐘,離心15分鐘,取上清160ul操作。

 

組織:取10%勻漿上清300ul加試劑一200ul,混勻,加試劑二100ul,漩渦充分混勻后靜置10分鐘,3500-4000轉/分鐘,離心15分鐘,取上清160ul操作。

 

B. 操作表:

 

空白孔

標準孔

測定孔

雙蒸水

160ul

 

 

20umol/L亞硝酸鈉標準液

 

160ul

 

上清液

 

 

160ul

顯色劑

80ul

80ul

80ul

  混勻,靜置15分鐘,波長550nm,用酶標儀測定各孔吸光度OD值。

 

 

4. 計算公式 略

 

5. 計算舉例

    A. 取血清0.1ml,按照測定要求所示,進行操作,所得空白孔吸光度為0.0406,標準孔為0.4117,測定孔吸光度0.0795,計算如下:

NO含量=  (0.0795-0.0406)÷(0.4117-0.0406)X20X4=8.38 umol/L

     

B. 取10%組織勻漿上清,按照測定所示要求,進行操作,所得空白孔吸光度為0.0406,標準孔吸光度為0.4117,測定孔吸光度0.0543,同時測得組織勻漿上清中總蛋白濃度為11.6574gprot/L,計算如下:

NO含量= (0.0543-0.0406) ÷(0.4117-0.0406)x20x2÷11.6574=0.127umol/gprot

  

6. 標準曲線的制備:  用雙蒸水將2mmol/L亞硝酸鈉標準溶液進行1:39, 1:79, 1:99, 1:159, 1:319, 1:639稀釋.即亞硝酸鈉標準液濃度依次為: 50umol/L, 25umol/L, 20umol/L, 12.5umol/L, 6.25umol/L,3.125umol/L

 

7. 注意事項:

A. 嚴格按照操作規程

B. 離心后的上層液一定要澄清,若有渾濁要再次離心

C. 溶血及渾濁血清對測定結果有影響

D. 培養液的測定參照血清(血漿)的操作及計算

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