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硝酸還原酶試劑盒檢測起來超方便!

更新時間:2019-10-22      瀏覽次數:1090

硝酸還原酶試劑盒檢測起來超方便!
 

硝酸還原酶是一種氧化還原酶,可催化硝酸離子還原成亞硝酸離子的反應。



硝酸還原酶位于細胞質內或細胞膜外,在硝酸鹽還原途徑中是限速因子,通過 NADH和 NADPH 其中之一或兩者( 雙功能) 提供兩個電子催化反應,使硝酸鹽轉換成亞硝酸鹽。



測定意義

NR EC 1.7.1.3 廣泛存在于植物中, 是植物 硝態 氮 轉化為氨態氮的關鍵酶,也是誘導酶,對作物的產量和品質有影響。



測定原理

NR催化 硝酸鹽還原為亞硝酸鹽 NO3ˉ +NADH+H → NO2ˉ +NAD +H 2 O 產生的亞硝酸鹽 能夠 在酸性條件下 與對 氨基苯磺酸及 α 萘胺 定量生成紅色偶氮化合物 生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有大吸收峰,可用分光光度法測定。


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樣品測定的前處理

組織的前處理:

(1 取適量誘導劑于燒杯中,將新鮮標本洗凈,濾紙吸干,放入誘導劑應用液中(淹沒即可),浸泡 2h ,取出樣本,濾紙吸干后20 冷凍 30min ,取出樣本,濾紙吸干。 (一般不要誘導處理,預測定結果沒有活性則需要 誘導處理)

(2 按照組織質量( g )):提取液體積 ( 為 1 5~10 的比例(建議 稱取約 0.1g 組織,加入

1mL 提取液 進行冰浴勻漿。 8 000g 4 離心 10min ,取上清,置冰上待測。



細菌或培養細胞的前處理:

先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(10 4 個):提取液體積( mL )為 500~1000 1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20 %或 200W ,超聲 3s ,間隔 10s ,重復 30 次); 8000g 4 離心10min ,取上清,置冰上待測。


植物體內的硝酸鹽在硝酸還原酶和亞硝酸還原酶的作用下,通過代謝途徑轉化為亞硝酸鹽,再轉化為銨,后被用于蛋白質的合成。土壤中硝酸鹽含量過高時,植物體內的硝酸還原酶和亞硝酸還原酶不發揮作用,從而導致硝酸鹽和亞硝酸鹽的積累。亞硝酸鹽是在葉片褐變和莖形成過程中產生的。亞硝酸鹽是亞硝基化劑的前體,亞硝基化劑與煙草生物堿反應生成煙草*亞硝胺(N-亞硝胺)。

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