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人神經營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒的發(fā)現史

更新時間:2014-07-29      瀏覽次數:1625

人神經營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒

人類發(fā)現的*個神經營養(yǎng)因子——神經生長因子( Nerve Growth Factor, NGF )首先是由意大利神經科學家 Rita Levi-Montalcini 和美國生物化學家 Stanley Cohen 于 1956 年分離成功; Cohen 還意外發(fā)現了另一種能促進表皮細胞生長、增殖和分化的生長因子,因而將該因子命名為表皮生長因子( Epidermal Growth Factor, EGF )。為此, Levi-Montalcini 和 Cohen 于 1986 年共同獲得了諾貝爾生理學或醫(yī)學獎。
神經生長因子的發(fā)現過程可追溯到 20 世紀 20~30 年代。美國神經科學家 Samuel Randall Detwiler 和美國胚胎學家 Viktor Hamburger 那時就已發(fā)現神經元所支配的靶細胞在神經元存活中具有重要作用。他們觀察到,兩棲動物胚胎背根神經節(jié)中的感覺神經元數量可因移植外加的肢芽( limb bud, 指胚體外側壁在將來發(fā)生四肢的區(qū)域向外膨出而形成的隆起)到靶細胞中而增加。相反,神經元數量可因去除正常的靶細胞而明顯減少。他們認為,由靶細胞引起的神經元數量改變是靶細胞影響成神經細胞增生與分化的反映。但在 40 年代,這種解釋受到意大利年輕的神經科學工作者 Rita Levi-Montalcini 的質疑,因為在她的實驗中,她驚奇地發(fā)現在胚胎的發(fā)育過程中神經元死亡是*正常的事。 1947 年秋, Levi-Montalcini 接受 Viktor Hamburger 教授的邀請前往美國參加他的工作,并重復她自己許多年前在雞胚上所做的實驗,這是 Levi-Montalcini 一生中的重要轉折點,后來她在自傳中如是寫道。 在關鍵的實驗中,她和 Viktor Hamburger 證實了與保留完整的肢芽的雞胚相比,去除雞胚的肢芽將導致更多的感覺神經元死亡。

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在中樞神經系統(tǒng)的發(fā)育過程中,神經細胞也發(fā)生正常死亡。 Hamburger 后來證實在胚胎發(fā)育過程中在雞脊髓外側運動柱中生成的運動神經元約有一半是注定要死亡(凋亡)的。而且,在類似于對感覺神經節(jié)的那些實驗中, Hamburger 發(fā)現運動神經元的死亡數量可因去除靶細胞而增加或因外加肢芽而減少。所以肌肉靶的大小對脊髓運動神經元的存活是極為重要的。現在知道,神經元過度生成過程后的死亡幾乎發(fā)生在中樞和周圍神經系統(tǒng)的任何部位。
Hamburger 和 Levi-Montalcini 的上述發(fā)現促使他們提出了神經營養(yǎng)因子( neurotrophic factor )的假設,這個假設認為發(fā)育中的神經元所支配的靶細胞可產生和分泌一種數量有限的但又是必需的營養(yǎng)性物質或營養(yǎng)因子,而這種營養(yǎng)性物質或營養(yǎng)因子可在神經末梢被攝取,那些不能獲得適量神經營養(yǎng)因子的神經元將會死亡(凋亡)。根據這一假設,zui終 Levi-Montalcini 和她在 Hamburger 實驗室的同事生物化學家 Stanley Cohen 一起成功分離了神經生長因子( nerve growth factor, NGF )。在這個過程中,有兩個重要的事件值得一提。

 

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*個事件

是在 Hamburger 和 Levi-Montalcini 證實靶組織具有調節(jié)神經元的存活數量后不久, Hamburger 以前的一個學生 Elmer Bueker 通過實驗證明了不同的腫瘤組織移植至小鼠能替代外周的靶細胞支持感覺神經元的存活。 Bueker 發(fā)現小鼠肉瘤組織可使感覺神經纖維廣泛長入腫瘤組織,他還觀察到脊髓中植入腫瘤的一側背根神經節(jié)明顯大于另一側相對應的神經節(jié)。這些成果被 Levi-Montalcini 和 Hamburger 進一步拓展,他們注意到在肉瘤植入近旁的交感神經節(jié)明顯增大,并進一步證實肉瘤細胞的作用是由一種可擴散的因子所引起的。 Levi-Montalcini 研制了可定量分析腫瘤組織對離體的感覺神經節(jié)和交感神經節(jié)存活和軸突生長的方法。 1956 年,她和生物化學家 Stanley Cohen 一起提純了這個可擴散的分子,并將這個分子命名為神經生長因子。
第二個事件

是在一個關鍵的生物化學實驗中, Cohen 和 Levi-Montalcini 為了排除 DNA 或 RNA 對神經產生營養(yǎng)作用的可能性。他們碰巧使用了一種粗制的蛇毒標本作為具有活性的磷酸二酯酶來降解存在于不*純化的 NGF 標本中的各種核酸,結果他們發(fā)現蛇毒本身具有比 NGF 更為顯著的促軸突快速生長效應。然后, Cohen 研究了雄性小鼠的頜下腺,這是在哺乳動物相當于蛇毒腺的部分,結果令人興奮地發(fā)現它富含 NGF ,這一結果啟示了可供 NGF 純化和蛋白測序的豐富來源。隨后的工作證明了 NGF 是由 2 個 a 、 2 個 b 和 2 個 g 亞單位組成的蛋白質,其分子量約為 130000 。 a 亞單位具有胰蛋白酶樣活性, b 亞單位的結構與胰島素相似,而 g 亞單位則為絲氨酸蛋白酶。 b 亞單位是 NGF 促進神經生長的主要活性部分 ,是一種含 118 個氨基酸殘基的序列 。
Rita Levi-Montalcini 于 1909 年 4 月 22 日 出生于意大利都靈市的一個 猶太人家庭。她的父親是個電機工程師和有天賦的數學家,母親是個有才華的畫家。 1936 年, Levi Montalcini 畢業(yè)于都靈醫(yī)學院,但由于當時墨索里尼法西斯*政權對猶太人的歧視政策,她的學術研究生涯不幸被暫時中斷。她先在都靈自己家里堅持科學研究工作,她把她的實驗室建在自己的臥室里。 1941 年因都靈遭受英美*的空襲迫使她放棄都靈,搬遷到鄉(xiāng)村農舍繼續(xù)她的實驗。 1943 年秋,德國*入侵意大利,迫使她 和家人一起 逃往佛羅倫斯, 在那里他們隱蔽地居住到戰(zhàn)爭結束。 1945 年 5 月。 她和家人才回到都靈,并恢復了她在大學的科學研究工作。 1947 年秋接受 Hamburger 教授的邀請到美國圣路易斯繼續(xù)她的研究,并在那里取得了舉世矚目的成就。她原本打算在圣路易斯逗留 10~12 個月,但由于出色的研究成果使她大大延遲了回意大利的時間。 1956 年,她被任為副教授, 1958 年起任正教授,直到 1977 年退休。 1962 年,她在羅馬建立了一個研究所,此后就在圣路易斯和羅馬兩個城市之間奔波。 1969~1978 年間,她還擔任意大利國家研究委員會細胞生物學研究所的主管, 1979 年退休后,她仍被聘為該研究所的客座教授。

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